Das Thermo Scientific™ GlycoLink IP Kit liefert die Komponenten für eine effektive Immunpräzipitation (IP und Co-IP) auf Basis der kovalenten Affinitätsharz-Immobilierung von Antikörpern und anderen Glykoproteinen über oxidierte Zucker-Gruppen im kleinen Maßstab.
- Effiziente Immobilisierung – Kopplung von 2 bis 10 μg oxidiertem Antikörper oder anderem Glykoprotein an 20 μl Harz in 2 Stunden oder weniger
- Die Resonanzstruktur der Hydrazonenbindungen ist ausreichend stabil, so dass der Antikörper während der Elution gekoppelt bleibt
- Immobilisiert IgG über die Fc-Region und hält damit beide Antigenbindungsstellen für die Bindung des Ziels bereit
- Immobilisieren Sie jedes Molekül, das oxidierbare Zucker enthält, einschließlich Glykoproteine zur Verwendung bei der Reinigung von Proteininteraktionspartnern.
Dieses Kit verwendet hydrazid-aktiviertes UltraLink Harz zur Immobilisierung und Durchführung von 25 IP- oder Co-IP-Assays mit verschiedenen Antikörpern oder Glykoprotein-Liganden. Die Methode eignet sich ideal für polyklonale Antikörper, die typischerweise reichlich Kohlenhydrate (Glykosylierung) auf ihren Fc-Anteilen haben. Monoklonale Antikörper, die adäquate Kohlenhydrate enthalten, sind ebenfalls wirksam. Antikörper, die durch diese Hydrazid-zu-Kohlenhydrat-Methode immobilisiert werden, haben freie antigen-bindende Stellen und optimale Aufreinigungsfähigkeit. Die vorbereiteten Glykoprotein- oder Antikörpersäulen können mindestens fünfmal regeneriert und wiederverwendet werden, um eine Immunpräzipitation, Co-Immunpräzipitation oder Pulldown-Affinitätsreinigung ohne signifikanten Verlust an Bindungskapazität zu ermöglichen.
Immunpräzipitation, gefolgt von Elektrophorese und Exzision des Proteins für die Massenspektrometrie oder Sequenzierung. Immunpräzipitation und SDS-PAGE-Analyse eines Proteins mit einem Molekulargewicht, das der schweren oder leichten Kette des Antikörpers ähnelt. CO-Immunpräzipitation zur Bestimmung von Protein-Protein-Interaktionen. Die Methode des Kits bewirkt eine kovalente Bindung von oxidierten Zucker-Gruppen eines IP-Antikörpers (oder eines anderen Glykoproteins mit oxidierbaren Kohlenhydratgruppen) an das Hydrazid-Harz. Das Antikörper-Harz wird anschließend mit der Probe, die das Proteinantigen von Interesse enthält, inkubiert, sodass sich ein Antikörper-Antigen-Komplex bilden kann. Nachdem die ungebundenen Komponenten der Probe durch Waschen entfernt wurden, wird das Antigen durch Lösung vom Antikörper mit dem im Kit enthaltenen Elutionspuffer wiedergewonnen. Das gesamte Verfahren erfolgt in einem Mikrozentrifugen-Spin-Becher, wodurch die Lösungen mittels kurzer Zentrifugation vollständig vom Harz getrennt werden können. Durch das Verfahren wird ausschließlich das Antigen eluiert, sodass es ohne den Einfluss von Antikörper-Fragmenten identifiziert und weiter analysiert werden kann.
Das Kit enthält Harz, Puffer und Reagenzien für die Immobilisierung, Entsalzungssäulen, IP-Lyse-/Wasch- und Elutionspuffer für die Immunpräzipitation, Mikrozentrifugenspin-Säulen und -Sammelröhrchen sowie Ladepuffer für SDS-PAGE.
Lieferumfang: Inhalt des Kits: UltraLink Hydrazid-Harz, 0,5 mL; GlycoLink Kopplungspuffer, 50 ml; Anilin, 0,2 ml; Natriummetaperiodat, 0,5 g; Waschpuffer, 60 ml; Zeba Spin Entsalzungssäulen,0,5 ml, 25 Säulen; IP Lyse-/Waschpuffer, 50 ml; PBS-Packung (ergibt 500 ml), 1 Packung; Elutionspuffer, pH 2,8, 50 ml; Lane Marker Probenpuffer, nicht reduzierend, (5x), 5 ml; Pierce Spin-Säulen mit Schraubverschluss, 25 Säulen; Sammelröhrchen, 2 ml, 100 Röhrchen.
